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重组蛋白纯化

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表达/细胞培养
收获、澄清过滤
粗纯-亲和层析
换液、浓缩
中度纯化-离子交换
精纯-分子筛/凝胶过滤
SPR分子互作
Western Blot 实验

表达/细胞培养 展开

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  • 在开始纯化前,先为目标蛋白表达准备合适的培养体系。您可以根据细胞类型和培养方式,选择培养基、血清以及常用培养辅料。
  • 如果使用含血清培养体系,可优先选择经典培养基搭配胎牛血清,并按需补充 PBS、双抗或消化酶;如果使用无血清表达体系,可根据 CHO、293 或昆虫细胞等表达系统选择对应培养基。

收获、澄清过滤 展开

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  • 蛋白表达完成后,通常需要先对样品进行澄清过滤,去除细胞碎片和颗粒杂质,为后续纯化步骤做好准备。
  • 请根据样品体积选择合适的过滤形式。小体积样品通常适合针头滤器,中等体积样品适合顶滤器,大体积样品适合囊式滤器。

粗纯-亲和层析 展开

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  • 使用目标蛋白所携带的标签进行亲和捕获,是重组蛋白纯化中最常见的第一步纯化方式。请根据蛋白标签、样品特点和使用方式选择合适的亲和层析产品。
  • 追求更高纯度可优先考虑高分辨率系列;更关注快速捕获可选择高流速系列;样品含 EDTA 或 DTT 等成分可选择耐受性更好的产品。预装柱适合快速上机,填料适合自行装柱或放大。

换液、浓缩 展开

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  • 在纯化过程中,您可能需要浓缩样品、去除小分子杂质,或将样品转入新的缓冲液体系。请根据上样体积和目标分子量选择合适的超滤产品。
  • 建议先确认单次上样体积,再选择截留分子量,最后选择包装规格。系统会根据这三个条件匹配到具体货号,避免在多个相似 SKU 中反复查找。

中度纯化-离子交换 展开

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  • 亲和捕获后,如果样品中仍含有宿主蛋白、核酸或其他杂质,可以使用离子交换层析进一步提高纯度。请根据蛋白等电点和缓冲液 pH 选择合适的离子交换方式。
  • 如果蛋白 pI 小于当前缓冲液 pH,通常可考虑阴离子交换;如果蛋白 pI 大于当前缓冲液 pH,通常可考虑阳离子交换。如不确定,可提示查看选型指南或咨询技术支持。

精纯-分子筛/凝胶过滤 展开

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  • 在最终精纯阶段,可以使用分子筛进一步分离目标蛋白、去除聚集体或改善样品均一性。请根据样本体积和目标分子量范围选择合适的分子筛产品。
  • 样本体积决定适合的柱规格,目标分离范围决定适合的分子筛系列。小体积样品可优先考虑高分辨率分析型产品,较大体积样品可选择制备纯化产品。

SPR分子互作 展开

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  • 用于为 SPR 分子互作实验配置常用 Biacore 耗材,包括传感芯片、偶联/捕获试剂、运行缓冲液以及再生和维护耗材。
  • 常规分子互作实验可优先选择 CM5 传感芯片搭配氨基偶联试剂盒和 HBS-EP+ 运行缓冲液;抗体相关实验可选择蛋白 A 传感芯片;如需自定义表面化学修饰,可选择裸金芯片。运行缓冲液、再生试剂和清洗维护试剂建议作为常配耗材多选加入方案。

Western Blot 实验 展开

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  • 完成纯化后,可通过WB实验鉴定纯化出的蛋白。WB实验亦可用于分析目的蛋白是否表达,表达量的高低变化。系统可根据实验环节推荐 Marker、转印耗材、转印膜、二抗和发光试剂。
  • 如果只需要补充某个环节的实验耗材,可单独选择电泳、转印、抗体孵育或曝光产品;如需要完整 WB 实验方案,可多选多个环节,系统组合推荐对应产品。
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